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Cell Counting Kit-8(CCK-8）

貨號(hào)：PC-1050

廠家：PCM（PlantChemmed）

介紹
補(bǔ)充信息
說明書

Cell counting Kit-8（CCK-8）細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格
PC-1050	Cell Counting Kit-8（CCK-8）	500T/5ml

保存：4℃避光可穩(wěn)定保存1年，若長(zhǎng)時(shí)間保存，可置于-20℃避光保存2年，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Cell Counting Kit-8（CCK-8）細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒是一種基于水溶性四唑鹽的細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒。它在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氧酶還原為可溶性的橙黃色甲臜（formazan），formazan的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。Cell Counting Kit-8（CCK-8）可用于藥物篩選，細(xì)胞增殖測(cè)定，腫瘤藥敏等試驗(yàn)。

使用方法（僅供參考）：

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）

1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6 個(gè)復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。）

二、細(xì)胞活性檢測(cè)

1、在96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2 的條件下）。

2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD 值的讀數(shù)）

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時(shí)。

4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm 處的吸光度。

5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

三、細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)

1、在96 孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)（在37 ℃，5% CO2 的條件下）。

2、向培養(yǎng)板加入10μL 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24 或48 小時(shí)）。

3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD 值的讀數(shù)）。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。

4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時(shí)。

5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm 處的吸光度。

6、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

活力計(jì)算：.

細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0 加藥)－A(空白)]×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

注意事項(xiàng)：

1.建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每次測(cè)定的過程中需要避免細(xì)菌污染，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

2.白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

3.當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1 ,000 個(gè)/孔(100 μL 培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度

相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔( 100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24 孔板或6 孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算

每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8 溶液。

4.如果沒有450nm 的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm 檢測(cè)靈敏度最高。

5.培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

6.CCk-8可以檢測(cè)大腸桿菌，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。

所需材料：

96孔板，CO2培養(yǎng)箱，酒精燈，移液器，酶標(biāo)儀等

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