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1、NP-40裂解液是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液，可以用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等實(shí)驗(yàn)蛋白樣品的制備。

2、用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定蛋白濃度。建議使用晶彩生物生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。

原理：

NP40作為非離子型去垢劑可以促進(jìn)細(xì)胞膜的崩解，是一種溫和的細(xì)胞組織裂解液。

操作步驟：

對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

1、融解NP-40裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM；

2、對于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解；

對于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管，然后再裂解；

充分裂解后，10000-14000rpm離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。 裂解液用量說明：通常6孔板每孔細(xì)胞加入150ul裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200ul或250ul。

對于組織樣品：

1、把組織剪切成細(xì)小的碎片；

2、融解NP-40裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM；

3、按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)；

4、用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解；

5、充分裂解后，10000-14000rpm離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作；

6、如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

可以制備樣品數(shù)：