眾所周知,鈣離子是中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞信號傳遞的重要介質(zhì)。鈣離子通過與各種鈣結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)激活信號,其中大多數(shù)蛋白屬于EF手性蛋白家族。
Iba1屬于17-kDa EF蛋白,在巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中特異性表達,起到正向調(diào)節(jié)的作用。
和光提供的兔多抗可識別Iba1羧基末端序列的合成肽,這段Iba1蛋白序列在人、大鼠和小鼠中均存在。這些抗體可特異性的識別小膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,適用于腦組織的雙重免疫染色,以及細(xì)胞培養(yǎng)中與GFAP單抗聯(lián)合使用(GFAP單抗可特異性的識別星形膠質(zhì)細(xì)胞)。
特征:特異性識別人、大鼠、小鼠的小膠質(zhì)細(xì)胞及巨噬細(xì)胞,無法作用于神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞。
大鼠原代的細(xì)胞培養(yǎng)的雙重免疫染色和同一位置的對比圖像
綠色:Iba1,小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞特異性蛋白抗體作用 (Wako Cat. #019-19741)
紅色:星形膠質(zhì)細(xì)胞,與GFAP單抗作用
(此數(shù)據(jù)由 日本神經(jīng)系統(tǒng)科學(xué)國家研究所神經(jīng)化學(xué)部提供)
Iba1抗體用于免疫細(xì)胞化學(xué)(Wako Cat. #019-19741) 石蠟切片應(yīng)用
1)去石蠟;
100%二甲苯 | 10分鐘 | 2次 |
100%乙醇 | 5分鐘 | 2次 |
80%乙醇 | 5分鐘 |
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70%乙醇 | 5分鐘 |
|
蒸餾水 | 5分鐘 | 2次 |
2)用0.01M緩沖液沖洗兩次;
3)在含0.3%過氧化氫的甲醇里孵育30分鐘;
4)用0.01M緩沖液沖洗三次;
5)在室溫下,放進含有1.5%山羊血清和1%牛血清蛋白的0.001MPBS的封閉液里孵育2小時;
6)在4度下,與 Anti Iba1 Antibody (0.5 μg/mL)(Wako Catalog No. 019‐19741)在封閉液中孵育過夜;
7)用0.01M PBS沖洗3次;
8)在室溫下,與生物素標(biāo)記的anti‐Rabbit IgG Antibody (1:200)在封閉液中孵育1小時;
9)用0.01M PBS沖洗3次;
10)在室溫下,與ABC試劑(試劑A(1:50)和試劑B(1:50)與0.01MPBS混勻)孵育1小時;
11)用0.01MPBS沖洗3次;
12)在過氧化物酶溶液(含0.01%過氧化氫,0.05%DAB的0.05MTris緩沖液)中孵育;
此產(chǎn)品來源為兔來源,更有山羊來源的iba-1抗體,且應(yīng)用更廣泛:WB,IHC,IF
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